< Previous18 4 / 2021 / vol. 10 Kosmetologia Estetyczna Artykuł ukazał się w „Aesthetic Cosmetology and Medicine” sów, a jednym z istotnych czynników jest poziom inwazyj- ności metody. Kosmeceutyki to produkty kosmetyczne stosowane miej- scowo (kremy, balsamy, sera i maści), opracowane w celu poprawy wyglądu starzejącej się skóry. Zazwyczaj nie pod- legają one takim procedurom testowania i zatwierdzania jak leki, ale wprowadzane są na rynek w oparciu o teoretycz- ne korzyści wynikające z badań in vitro zawartych w nich składników aktywnych. Szczegółowe regulacje prawne do- tyczące stężenia komponentów i deklarowanej aktywności różnią się w poszczególnych krajach. Peptydy zawierające od kilku do kilkunastu reszt amino- kwasowych, pełnią wiele funkcji biologicznych i coraz czę- ściej stosowane są jako składniki kosmeceutyków. Istnieje wiele dowodów potwierdzających ich korzystny wpływ na ograniczenie efektów starzenia się skóry [4]. Peptydy pełnią ważną rolę w wielu naturalnych procesach związanych z fi- zjologią skóry, takich jak modulacja proliferacji komórek, stany zapalne, migracja komórek, melanogeneza, angioge- neza oraz synteza i regulacja białek, w tym kolagenu. W Sta- nach Zjednoczonych, w produktach do pielęgnacji skóry stosuje się ponad 25 różnych peptydów, a wiele innych jest przedmiotem zainteresowania firm kosmetycznych na ca- łym świecie. Peptydom stosowanym w kosmeceutykach po- święcono wiele artykułów przeglądowych [5-10]. Peptydy kosmeceutyczne dzieli się zazwyczaj na trzy grupy: sygna- łowe, nośnikowe i wpływające na neuroprzekaźniki (rys. 1). AKTYWNOŚĆ BIOLOGICZNA ARGIRELINY Wśród składników odpowiedzialnych za działanie prze- ciwzmarszczkowe kosmeceutyków, znajdują się substan- cje wpływające na ogólny stan skóry przez nawilżenie, sty- mulację produkcji kolagenu i zwiększenie grubości skóry (m.in. kwas retinowy, kwas hialuronowy, alfa-hydroksy- kwasy, przeciwutleniacze, estrogeny, czynniki wzrostu), do- datkowo niektóre produkty naturalne i peptydy (np. Argire- lina) wpływają na napięcie mięśniowe [11, 12]. Argirelina jest jednym z peptydów wpływających na neu- roprzekaźniki, wykazuje aktywność podobną do toksy- ny botulinowej (Botox). Obie substancje działają miejsco- wo rozluźniając mięśnie poprzez hamowanie zależnego od jonów wapnia uwolnienia acetylocholiny, zakłócając we- dług różnych mechanizmów tworzenie kompleksu recep- tora (SNARE) białka związanego z synaptosomem (SNAP) [13]. Chociaż prawidłowo aplikowany Botox jest bezpiecz- ny, znane są ogólnoustrojowe skutki uboczne i przeciw- wskazania, które należy wziąć pod uwagę przed rozpoczę- ciem tego typu zabiegów kosmetycznych [14]. Strach przed igłą znacznie ogranicza stosowanie Botoxu, dlatego powsta- ła cała gama produktów kosmetycznych określanych jako „botox-like, needle-free” o działaniu podobnym do Botoxu, ale bez konieczności wstrzykiwania (kremy, sera, wypeł- niacze). Ich zalety to możliwość samodzielnej aplikacji, ła- godniejsze działanie pozwalające na długotrwałe stosowa- nie oraz brak skutków ubocznych. Argirelina jest klasyfikowana jako inhibitor neuroprzekaź- ników [14, 15]. Poszukiwanie informacji na temat tego pep- tydu jest utrudnione ze względu na wiele stosowanych nazw [16] opartych na nazewnictwie peptydów, np. amid N-ace- tylo-L-alfa-glutamylo-L-alfa-glutamylo-L-metionylo-L-glu- taminylo-L-arginylo-L-argininy (L-Argininamide, N-Acetyl- -L-Alpha-Glutamyl-L-Alpha-Glutamyl-L-Methionyl-L-Glutami- nyl-L-Arginyl-) czy acetylo-Glu-Glu-Met-Gln-Arg-Arg-amid (Acetyl-Glu-Glu-Met-Gln-Arg-Arg-amide), a także na systemie OH O NH NHNH O NH2 O OH O OH NH O NH2 NH O OH OH NH NH NH2 O OH NH O O O NH O NH2NH NH NH O OOH O OOH NH O S NH O ONH2 NH NH2NH O NH NH2NH NH O O Cu-GHK ArgirelinaSyn-AkeLeuphasyl . pal-VGVAPG OHNH NH2 O O N NH NH O NH2 Cu 2+ NH O NH2N O NH2 NH O O OH NNH NH O O NH O NH O O NH O pal-KTTKS Peptydy wpływające na neuroprzekaźniki Peptydy sygnałowe Peptyd nośnikowy Rys.1 Wybrane peptydy kosmeceutyczne Źródło:Opracowanie własne na podstawie [5, 7]19 4 / 2021 / vol. 10 Kosmetologia Estetyczna Artykuł ukazał się w „Aesthetic Cosmetology and Medicine” CAS [616204-22-9] i UNII L4EL31FWIL (Global Substance Re- gistration System Unique Ingredient Identifi er). Stosuje się tak- że nazwę acetylo-heksapeptyd-3 (acetyl hexapeptide-3) wg WHO-DD oraz acetylo-heksapeptyd-8 (acetyl hexapeptide-8) wg INCI. W niniejszej pracy używana jest nazwa zwycza- jowa „Argirelina”, należy jednak zaznaczyć, że fi rma Lipo- tec oferuje pod nazwą Argireline® preparat zawierający 0,5 g peptydu w jednym litrze (tzn. roztwór wodny o stężeniu 0,05%, czyli około 0,56 mM) [17]. Sekwencja aminokwasowa Argireliny pochodzi z N-koń- ca (reszty 1-12) 25 kDa białka związanego z synaptosomem (SNAP-25) [14]. Argirelina hamuje tworzenie rozpuszczal- nego kompleksu SNARE, który składa się z białka błonowe- go związanego z pęcherzykami (VAMP), syntaksyny i biał- ka SNAP-25 [15, 18]. SNAP-25 jest niezbędny do uwolnienia acetylocholiny z pęcherzyków (rys. 2). Kompleks SNARE odpowiada za połączenie pęcherzyków z błoną plazmatycz- ną. Wynikiem tego procesu jest wydzielanie neuroprzekaź- ników z zakończeń nerwowych, które jest zależne od jonów Ca2+. Argirelina konkuruje z białkiem SNAP-25 o pozycję w kompleksie SNARE. Destabilizacja kompleksu SNARE ha- muje uwalnianie neuroprzekaźników, uniemożliwiając eg- zocytozę wywołaną jonami Ca2+. Wówczas skurcz mięśnia ulega osłabieniu, co zapobiega powstawaniu linii i zmarsz- czek mimicznych [15]. do zmniejszenia głębokości zmarszczek o 30% [15]. W in- nym badaniu, stosowanie 2% roztworu Argireliny zmniej- szyło głębokość zmarszczek już po tygodniu [19]. Redukcję zmarszczek o 27% zaobserwowano u 10 kobiet po zastoso- waniu dwa razy dziennie kremu z 5% roztworem Argireliny [5]. W badaniu Ruiz i wsp. testowano emulsję zawierającą Argirelinę na grupie 20 osób, uzyskując redukcją zmarsz- czek w zakresie od 41,83% do 78,25% [20]. Według amerykańskiej Narodowej Biblioteki Medycznej (US National Library of Medicine, NLM) prowadzone były ba- dania kliniczne Argireliny [21]. Dwa z nich dotyczyły kur- czu powiek (blepharospasm), ogniskowej dystonii dotyka- jącej głównie mięśni okrężnych oka. Argirelina jako konku- rencyjny inhibitor SNAP-25 jest rozważana jako zamiennik neurotoksyny botulinowej, stosowanej regularnie w lecze- niu kurczu powiek. Chociaż wyniki badań klinicznych nie były jednoznaczne, profi l bezpieczeństwa i obserwowane efekty sugerują, że Argirelina może znaleźć zastosowanie medyczne [22]. Warto dodać, że badano wpływ Argireliny na proliferację komórek ludzkich in vitro. Wyraźny efekt antyproliferacyj- ny (67% hamowania) zaobserwowano przy stężeniu 100 µM (90 µg/ml), podczas gdy przy niższym stężeniu nie zaobser- wowano różnicy między Argireliną a próbą kontrolną. Ak- tywność cytotoksyczną wobec ludzkich fi broblastów skóry stwierdzono tylko w przypadku stosunkowo wysokich stę- żeń po długotrwałej ekspozycji [23]. Prowadzono także badania kliniczne dotyczące miejsco- wego stosowania Argireliny w leczeniu zmarszczek około- oczodołowych i skuteczności redukcji zmarszczek przez zastosowanie nowego złożonego kremu do pielęgnacji skó- ry, który zawiera między innymi Argirelinę. Najnowsze ba- dania, prowadzone przez Wayne State University, Michi- gan, USA, mają zakończyć się w 2021 r. [21]. Szczegółowy raport na temat działania Argireliny został opublikowany przez Panel Ekspertów ds. Bezpieczeństwa Składników Ko- smetycznych (Expert Panel for Cosmetic Ingredient Safety) [34]. PRZENIKANIE PRZEZ SKÓRĘ Substancje aktywne zawarte w kosmetykach, w tym pep- tydy, muszą być dostarczane do skóry w stabilnej posta- ci oraz wykazywać zdolność do wywoływania pożądanego efektu biologicznego in vivo. Istotnym problemem w przeni- kaniu substancji przez skórę jest warstwa rogowa naskór- ka, która stanowi barierę dla związków o masie cząsteczko- wej większej niż 500 Da. Nie dziwi więc fakt, że przenikanie cząsteczki Argireliny (888 Da) w głąb skóry jest ograniczo- ne. Proces ten zależy jednak w dużej mierze od składu sto- sowanego preparatu [23, 24, 28]. Do badania stopnia penetracji skóry przez Argirelinę wy- korzystano między innymi preparaty skóry świnki morskiej oraz ludzkiej. Wyniki przeprowadzonego eksperymentu in vitro wykazały, że Argirelina wnika głównie do warstwy ro- Acetylocholina Destabilizacja kompleksu SNARE Receptor acetylocholiny Impuls nerwowy Osłabienie skurczu mięśni Mięśnie rozluźnione A R G I RR E L I NN A Rys.2 Mechanizm działania Argireliny Źródło:Rysunek własny na podstawie [17] Kosmetyki zawierające Argirelinę są bezpieczną alter- natywą terapii botoksem w celu redukcji linii i zmarszczek na twarzy [15]. Istnieje wiele opracowań potwierdzających przeciwzmarszczkowe działanie Argireliny [5, 6, 15, 19, 20]. W jednym z nich opisano, że stosowanie dwa razy dziennie przez 30 dni emulsji olejowo-wodnej (O/W) zawierającej 10% roztwór Argireliny doprowadziło w grupie 10 kobiet 20 4 / 2021 / vol. 10 Kosmetologia Estetyczna Artykuł ukazał się w „Aesthetic Cosmetology and Medicine” gowej naskórka (0,54% zastosowanej dawki w przypad- ku świnki morskiej oraz 0,22% dla skóry ludzkiej). W obu przypadkach ilość Argireliny wykryta w naskórku była zbli- żona i wynosiła 0,01%. Nie jest pewne, czy tak niewielkie ilości Argireliny przenikające do naskórka są wystarczające do wywołania efektu fi zjologicznego. Argireliny nie wykryto w skórze właściwej, a jej metabolitów nie znaleziono w żad- nej z warstw skóry [26]. Zmarszczki pojawiają się głęboko w skórze właściwej, a kosmetyki przeciwstarzeniowe często słabo penetrują warstwę rogową naskórka, stąd ich ograniczone działanie. Dlatego też profesjonalne zabiegi kosmetyczne z zastoso- waniem takich metod jak: jonoforeza, mikroigiły, sonofore- za, termoablacja czy ablacja promieniowaniem elektroma- gnetycznym o częstotliwości radiowej, wspomagają wnika- nie kosmetyków [27, 28]. ANALOGI ARGIRELINY – ZALEŻNOŚĆ STRUKTURA-AKTYWNOŚĆ Zależność struktura-aktywność (structure-activity relation- ship, SAR) jest wykorzystywana do przewidywania fi zyko- chemicznych lub biologicznych właściwości substancji. Uzyskane informacje mogą posłużyć w ustaleniu, które części cząsteczki odpowiadają za jej aktywność biologicz- ną. Niestety niewiele wiadomo na temat zależności między strukturą i aktywnością biologiczną Argireliny. Na rysun- ku 3 przedstawiono dotychczas opisane analogi Argireliny. Przykładem pochodnej Argireliny jest acetylo-oktapep- tyd-3 (acetyl octapeptide-3) o sekwencji: Ac-Glu-Glu-Met- -Gln-Arg-Arg-Ala-Asp-NH 2. Uważa się, że peptyd ten redu- kuje zmarszczki skuteczniej niż Argirelina [29]. Analogi Argireliny modyfi kowane w pozycji 6 łańcucha peptydowego były badane przez Kraeling i wsp. [26]. Resz- ta argininy została zastąpiona znakowaną izotopowo formą tego aminokwasu: (13C 6, 15 N 4)Arg. Związki te wykorzystano jako wzorce wewnętrzne (internal standards, IS) w oznacze- niach ilościowych Argireliny w produktach kosmetycznych metodą LC-MS. W badaniach użyty został analog Argireliny o sekwencji H-Asp-Glu-Met-Gln-Arg-Arg-NH 2 do monitoro- wania utleniania Argireliny podczas przygotowywania pró- bek do analizy [30]. Oddziaływanie jonów miedzi(II) z Argireliną badano wy- korzystując trzy analogi: H-Glu-Ala-Met-Gln-Arg-Arg-NH 2, H-Glu-Ala-His-Gln-Arg-Arg-NH 2 i H-Glu-Ala-Met-Gln-Ala- -Arg-NH 2 [31]. Najbardziej stabilne kompleksy tworzył pep- tyd H-Glu-Ala-His-Gln-Arg-Arg-NH 2, w którym imidazolo- NH2 O OOH NH O NH NH NH NH NH2 O S O ONH2 O NH NH2NH O O NH O OO NH O OO NH NH NH NH NH2 O S O ONH2 NH NH N O NH NH N O O OO O O O NH O OO NH O OO NH NH NH NH NH2 O S O ONH2 NH NH N O NH NH N O O O O O O O O NH2 O OOH NH O NH NH NH NH NH2 O S O NH NH2NH O NH NH2 NH O N N H G. NH O OOH NH O OOH NH NH NH NH NH2 O S O ONH2 NH NH2NH O NH C NH2NH CH O C CH2 CH2 CH2 O NH2 O OOH NH O OOH NH NH NH NH NH2 O S O ONH2 NH NH2NH O NH C NH2NH CH O C CH2 CH2 CH2 NH2 O NH O OOH NH NH NH NH NH2 O S O ONH2 NH NH2NH O NH NH2NH O O OH NH2 O OOH NH O NH NH NH NH NH2 O S O ONH2 NH NH2NH O NH NH2 NH O NH O OO NH O OO NH NH NH NH NH2 O S O ONH2 NH NH2NH O NH NH2NH O O A. C.D.E. .H. I. F. J.K. B. NH O OOH NH O OOH NH NH NH NH NH2 O S O ONH2 NH NH2NH O NH NH2NH O O NH O OOH NH O OOH NH NH NH NH O S O ONH2 NH NH2NH O NH NH2NH O O O NH O O NH OH NH2 Rys.3 Wzory strukturalne Argireliny (A) i jej analogów (B-K). B: Ac-Glu-Glu-Met-Gln-Arg-Arg-Ala-Asp-NH 2, C: Ac-Glu-Glu-Met-Gln-Arg-(13C 6, 15 N 4)Arg-NH2, D: H-Glu-Glu-Met-Gln-Arg-(13C 6, 15 N 4)Arg- NH 2, E: H-Asp-Glu-Met-Gln-Arg-Arg-NH 2, F: H-Glu-Ala-Met-Gln-Arg-Arg-NH 2, G: H-Glu-Ala-Met-Gln-Ala-Arg-NH 2, H: H-Glu-Ala-His-Gln-Arg-Arg-NH 2, I: Ac-Glu(OMe)-Glu(OMe)-Met-Gln-Arg-Arg- NH 2, J: Ac-Glu(OMe)-Glu(OMe)-Met-Gln-Arg(Boc) 2-Arg(Boc)2-NH2, K: Ac-Glu(OMe)-Glu(OMe)-Met-Gln-Arg(Ac) 2-Arg(Ac)2-NH2. Czerwona litera N oznacza izotop 15 N; niebieska litera C - izotop 13 C Źródło:Opracowanie własne. Struktury na podstawie sekwencji przedstawionych w [26, 29-32]21 4 / 2021 / vol. 10 Kosmetologia Estetyczna Artykuł ukazał się w „Aesthetic Cosmetology and Medicine” wy atom azotu reszty histydyny koordynował jon metalu. Stwierdzono także, że acetylowanie N-końcowej grupy ami- nowej nie wpływa na strukturę powstającego kompleksu. W innej pracy przedstawiono przenikanie przez skórę i zdolność do redukcji zmarszczek za pomocą trzech po- chodnych Argireliny (rys. 3, struktury I, J, K) [32]. Zastoso- wane modyfikacje strukturalne miały spowodować wzrost lipofilowości oraz masy molowej tych peptydów. Wyni- ki sugerują, że peptydy: Ac-Glu(OMe)-Glu(OMe)-Met-Gln- -Arg(Ac) 2-Arg(Ac)2-NH2 i Ac-Glu(OMe)-Glu(OMe)-Met-Gln- -Arg(Boc) 2-Arg(Boc)2-NH2 mogą znaleźć zastosowanie w ko- smetologii. Należy podkreślić, że badania zależności między struk- turą i aktywnością biologiczną Argireliny powinny być kon- tynuowane, przede wszystkim w odniesieniu do ewentual- nej toksyczności. ZAWARTOŚĆ ARGIRELINY W PRODUKTACH KOSMETYCZNYCH Chociaż dostępnych jest wiele produktów kosmetycznych zawierających Argirelinę, informacja o rzeczywistej za- wartości tego peptydu w danym preparacie jest trudna do ustalenia. Deklarowany zakres stężeń Argireliny w 354 pro- duktach zgłoszonych w programie rejestracji kosmetyków (Food and Drug Administration, Voluntary Cosmetic Registration Program) wynosi od 0,000005 do 0,005% [33, 34]. Zgodnie z przepisami – główne składniki na etykietach produktów kosmetycznych wymieniane są według malejącej zawarto- ści aż do 1%, natomiast kolejność pozostałych składników zależy od decyzji producenta. Dane przedstawione w tabe- li 1 pochodzą z opisów preparatów zastosowanych w ba- daniach klinicznych, z patentów lub deklaracji producen- tów. Według raportu panelu ekspertów ds. bezpieczeństwa składników kosmetycznych (The Expert Panel for Cosmetic In- gredient Safety) bezpieczne stężenie Argireliny (wymienio- nej w INCI jako Acetyl Hexapeptide-8 Amide) w kosmety- kach wynosi do 0,005% [34]. Ostatnie zalecenia dotyczące analizy składników kosme- tyków, nie zawierają metod oznaczania peptydów [39]. Licz- ba doniesień naukowych dotyczących analizy peptydów w produktach kosmetycznych jest ograniczona. W przy- padku Argireliny przeprowadzono systematyczne bada- nia oparte na chromatografii oddziaływań hydrofilowych sprzężonej z tandemową spektrometrią mas (HILIC–MS/ MS) [40, 41]. Przygotowanie próbek obejmowało ekstrakcję badanej porcji produktu kosmetycznego przy użyciu mie- szaniny acetonitrylu, wody, kwasu trifluorooctowego i kwa- su mrówkowego (85:15:0,1:01, v:v), a następnie ekstrakcję do fazy stałej (SPE). Do badań odzysku i analizy ilościowej zastosowano wzorce wewnętrzne w postaci znakowanych izotopowo peptydów (odpowiednio Argirelina i jej deacety- lowany analog, rys. 3, struktury C i D). Najwyższe wykry- te stężenie Argireliny wyniosło 42,30 µg/g, co odpowiada 4,23 mg/100 g i mieści się w zakresie stężeń podanych w ta- beli 1. Warto zauważyć, że nie wykryto deacetylowanej po- staci Argireliny. Stosunkowo prostą procedurę przygotowania próbki za- stosowano w badaniach przenikania Argireliny, w których do wypełnienia komory receptorowej i ekstrakcji taśm adhezyjnych (tape stripping) użyto 0,1% wodnego roztworu kwasu mrówkowego. Otrzymane roztwory analizowano me- todą LC-MS/MS [28]. Argirelina została wykorzystana jako wzorzec wewnętrzny przy opracowaniu procedury ozna- czania peptydu SNAP-8 metodą LC-MS/MS (rys. 3, struktu- ra B) w biodegradowalnych plastrach z mikroigłami. Przy- gotowanie próbki polegało na ekstrakcji wodą i sączeniu, ze względu na stosunkowo prostą matrycę wypełnienia mi- kroigieł [29]. PRZEMIANY ARGIRELINY – UTLENIANIE Jedyną reakcją degradacji Argireliny, którą badano do tej pory w dostępnych na rynku kosmetykach jest deacetylacja [40]. Jednak w sekwencji Argireliny znajduje się reszta me- tioniny, która jest podatna na utlenianie. Może ona ulegać utlenianiu w łagodnych warunkach, dlatego autorzy posta- nowili sprawdzić, czy i w jakim stopniu reakcja ta zachodzi podczas przechowywania produktów kosmetycznych [30]. Identyfikację utlenionej Argireliny metodą spektrometrii mas ułatwia charakterystyczna strata neutralna CH 3SOH obserwowana podczas fragmentacji pod wpływem zderzeń (collision-induced dissociation, CID) (rys. 4) [42]. W swoich badaniach autorzy starali się opracować prost- szą i bardziej ekonomiczną metodę analizy Argireliny i jej ewentualnych produktów utleniania, która nie będzie wy- magała użycia wzorców znakowanych izotopowo [30]. W celu przeprowadzenia analizy ilościowej, do próbek do- Tabela1 Zawartość Argireliny w wybranych produktach kosmetycznych ProduktZawartość ArgirelinyŹródło deklarowana w 100 g produktu HydroGold 9 (plaster) 0,01 mg/100 mg10 mg[35] Argireline Solution 10% (The Ordinary) 10% *5 mg[36] Laser Rejuvenation restoring damage skin (krem) 0,0001 ml/1 ml**[37] Scinic Peptide Ampoule 95 1 ppm0,1 mg[33] Patent (związki hamujące egzocytozę neuronalną) 0,005%5 mg[38] * 10% Argireline® (0,05% roztwór peptydu) ** dostępne dane nie pozwalają na przeliczenia Źródło:Opracowanie własne22 4 / 2021 / vol. 10 Kosmetologia Estetyczna Artykuł ukazał się w „Aesthetic Cosmetology and Medicine” Rys.5 Chromatogramy LC-MS syntetycznej Argireliny (górny panel) i wybranych produktów typu serum (produkty 1-4). Linie szare przedstawiają całkowity prąd jonowy, linie niebieskie i czer- wone reprezentują ekstrahowane chromatogramy (XIC) odpowiednio Argireliny i jej formy utlenionej (chromatogramy te zostały powiększone trzykrotnie, aby uwydatnić zmiany). ProceduraLC-MS: Chromatograf Shimadzu Nexera sprzężony ze spektrometrem mas IT-TOF, kolumna Aeris Peptide XB-C18 (50×2,1 mm, 3,6 µm, Phenomenex), gradient od 5 do 80% acetoni- trylu w wodzie, zawartość kwasu mrówkowego 0,1%. Szczegółowy opis przedstawiono w [30] Źródło:Wyniki własne autorów 200300400500600700800900m/z 0.0 2.5 5.0 7.5 Inten. (x100,000) 453.2145 453.7156 329.0036 173.0780 100200300400500600700800900m/z 0.0 0.5 1.0 1.5 Inten. (x10,000,000) 445.2185 482.2351 889.4302 100200300400500600700800900m/z 0.00 0.25 0.50 0.75 1.00 1.25 Inten. (x100,000) 359.6923 295.1692 172.0600 350.6853 436.7068 572.3049 407.2073701.3597 128.4774 200300400500600700800900m/z 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 Inten. (x10,000) 421.2151 303.0327 367.6891 171.1198 Utleniona Argirelina [M+2H]2+ Argirelina [M+2H]2+ Ac-Glu-Glu-Met-Gln-Arg-Arg-NH2 Y5 359 (+2) Y4 295 (+2) Y1 172 (+1) Utleniona Argirelina [M+2H-64]2+ 64: strata neutralna CH3SOH 0.01.02.03.04.05.06.07.08.09.0min 0.0 2.5 (x10,000,000) 0.01.02.03.04.05.06.07.08.09.0min 0.0 2.5 (x10,000,000) 0.01.02.03.04.05.06.07.08.09.0min 0.0 1.0 2.0 3.0 (x10,000,000) 0.01.02.03.04.05.06.07.08.09.0min 0.0 2.5 5.0 7.5 (x10,000,000) 0.01.02.03.04.05.06.07.08.09.0min 0.0 2.5 5.0 (x10,000,000) Syntetyczna Agirelina Produkt 1 Produkt 2 Produkt 3 Produkt 4 TIC – całkowity prąd jonowy XIC 445,219 m/z (Argirelina) XIC 453,216 m/z (utleniona Argirelina) Rys.4 Widma masowe (panele górne) oraz widma fragmentacyjne (panele dolne) Argireliny (445,2185 m/z) i jej formy utlenionej (453,2145 m/z) (spektrometr mas Shimadzu IT-TOF) Źródło:Wyniki własne autorów23 4 / 2021 / vol. 10 Kosmetologia Estetyczna Artykuł ukazał się w „Aesthetic Cosmetology and Medicine” dano jako wzorzec wewnętrzny analog Argireliny o se- kwencji H-Asp-Glu-Gln-Met-Arg-Arg-NH 2 (rys. 3, struktura E). W tym analogu resztę kwasu glutaminowego zastąpio- no kwasem asparaginowym, aby wprowadzić różnicę mas, przy zachowaniu podobnej wydajności jonizacji. Zrezygno- wano z grupy acetylowej, aby zwiększyć hydrofilowość pep- tydu, a tym samym skrócić jego czas retencji w RP-HPLC. Peptyd nadal zawierał resztę metioniny i służył jako wskaź- nik utlenienia. Ze względu na złożoną matrycę produktów kosmetycz- nych, która zawiera wiele substancji niekompatybilnych z MS, takich jak kwasy tłuszczowe, emulgatory i konser- wanty (tabela 2), przygotowanie próbki do analizy LC-MS jest poważnym problemem [30]. Ponadto formulacja ko- smetyków ma zapobiegać rozpuszczaniu się i rozdzielaniu faz, co sprawia, że wyodrębnianie peptydów z takich pro- duktów jest trudne. Dlatego opracowano procedurę przy- gotowania próbki, zgodnie z którą porcję produktu ekstra- howano przez 3 godziny mieszaniną 5% wodnego kwasu trifluorooctowego i α,α,α-trifluorotoluenu, uży wając łaźni ultradźwiękowej. Odwirowanie mieszaniny ułatwiało roz- dzielenie warstw. Pobierano górną warstwę wodną, którą po rozpuszczeniu w wodzie poddano analizie LC-MS [30]. Tabela2 Główne składniki zawarte w badanych produktach kosmetycznych (w porządku al- fabetycznym) Typ produktu Składniki Krem Aqua, Argireline, Butylene Glycol, Butyrospermum Parkii Butter, C12-15 Alkyl Benzoate, Caprylic/Capric Triglyceri- de, Caprylyl Glycol, Carbomer, Centella Asiatica Leaf Extract, Ceramide NG, Cetearyl Alcohol, Chlorhexidine Digluconate Dextran, Citric Acid, Dimethicone, Dipeptide Diaminobuty- royl Benzylamide Diacetate, Disodium Oleate, Glycerin, Gly- cine Soja Oil, Heptapeptide-7, Hydrogenated Lecithin, Hy- droxypropyl Cyclodextrin, Lactic Acid, Leuconostoc/Radish Root Ferment Filtrate, Magnesium PCA, N-Prolyl Palmitoyl Tripeptide-56 Acetate, Oligopeptide-68, Olus Oil, Palmitoyl Hexapeptide-12, Palmitoyl Tripeptide-1, Palmitoyl Tripepti- de-38, Palmitoyl Tripeptide-8, Panthenol, Parfum (Fragran- ce), Peg-10 Phytosterol, Pentylene Glycol, Persea Gratissima Oil, Phenoxyethanol, Polysorbate 20, Potassium Sorbate, Pro- panediol, Snail Secretion Filtrate, Sodium Benzoate, Sodium Citrate, Sodium Lactate, Spilanthes Acmella Flower Extract, Steareth-20, Tetrapeptide-4, Tocopherol, Tocopheryl Acetate, Triethanolamine, Undaria Pinnatifida Cell Culture Extract, Xanthan Gum Serum Aqua, Argireline, Caprylyl Glycol, Ethylhexyl Glycerin, Glyce- rin, Lecithin, Phenoxyethanol, Ubiquinone Źródło:Analiza na podstawie informacji zawartych w suplemencie do [30] Na chromatogramach LC-MS wykryto zarówno Argireli- nę, jak i jej formę utlenioną (rys. 5). Utlenianie powoduje za- równo różnicę mas w widmach MS, jak i występowanie cha- rakterystycznej straty neutralnej w widmach fragmenta- cyjnych CID (rys. 4). Ponieważ zaobserwowano, że wzorzec wewnętrzny ulega nieznacznemu utlenieniu w czasie przy- gotowania próbki, zmodyfikowano procedurę tak, aby zmi- nimalizować ten efekt. Kluczowe było pominięcie wstępne- go etapu odparowania próbek, co pozwoliło na ogranicze- nie utlenienia wzorca wewnętrznego. Okazało się jednak, że Argirelina izolowana w tych warunkach z produktów ko- smetycznych była nadal w dużym stopniu utleniona. W nie- których przypadkach utlenienie było całkowite [30]. Wspo- mniany proces może wynikać nie tylko z kontaktu z tlenem atmosferycznym, ale również z występowania w kosmety- kach składników, które mogą pełnić rolę utleniaczy. Aby przygotować kosmeceutyk o pożądanym działaniu, w recepturze kremu lub serum uwzględniane są substancje o odpowiednich właściwościach, a także stabilizatory i kon- serwanty (tab. 2) [43, 44]. Dynamiczny rozwój metod ana- litycznych umożliwia szybką identyfikację produktów roz- kładu substancji czynnych [45, 46]. Wykrywanie i identy- fikacja ewentualnych modyfikacji grup funkcyjnych reszt aminokwasowych i łańcucha głównego peptydu są niezbęd- ne zarówno ze względu na wymogi prawne, jak i wiarygod- ność oceny działania kosmeceutyków. Peptydy i białka mogą ulegać spontanicznym przemianom chemicznym. Trwałość preparatów kosmetycznych zawierających Argirelinę ba- dana była przez Ruiz i wsp. [20]. Stwierdzono, że Argireli- na przechowywana w temperaturze 25ºC jest trwała, jednak po ogrzewaniu przez 24 godziny w 40ºC jej zawartość spa- da do 59%, a w 60ºC – do 41%. Wyniki te wyraźnie pokazują, że podwyższona temperatura jest czynnikiem, który należy uwzględnić, szczególnie jeżeli proces formulacji wymaga ta- kich warunków. Stabilność i aktywność peptydów zależy nie tylko od ich odporności termicznej i proteolitycznej [47, 48]. Peptydy, zwłaszcza te zawierające resztę metioniny, mogą ulegać utlenieniu. Wykazano, że Argirelina, ze względu na obecność reszty metioniny, ulega takiemu utlenianiu, będą- cemu efektem działania powietrza lub obecnością w prepa- racie składników działających jako utleniacze [30]. PROBLEM UTLENIANIA BIOAKTYWNYCH PEPTYDÓW Analiza niektórych bioaktywnych peptydów wykazała obec- ność zanieczyszczeń, które powstają głównie w wyniku re- akcji, zachodzących w łańcuchach bocznych aminokwasów podatnych na utlenianie lub eliminację. Reakcje utleniania mogą zachodzić podczas produkcji, oczyszczania i prze- chowywania, przekształcając podatne na utlenienie resz- ty aminokwasowe i zmieniając aktywność biologiczną pep- tydów [49]. Wśród 20 naturalnych aminokwasów, najbar- dziej podatne na utlenianie są łańcuchy boczne zawierające siarkę (Met i Cys), a także ugrupowania aromatyczne (His, Trp, Tyr i Phe) [50]. Dzięki analizie LC-MS wykryto i ozna- czono ilościowo utlenianie metioniny (Met) w różnych bio- molekułach [51]. Utlenienie Met do sulfotlenków lub sul- fonów może powodować niekorzystne skutki, w tym utra- tę aktywności, zmniejszoną trwałość lub wzrost tendencji 24 4 / 2021 / vol. 10 Kosmetologia Estetyczna Artykuł ukazał się w „Aesthetic Cosmetology and Medicine” do agregacji. Utlenienie Met8 w parathormonie (PTH) po- woduje obniżenie aktywności tego hormonu, a także może skutkować hydrolizą wiązania peptydowego między Met8 i His9 [52, 53]. W przypadku cyklolinopeptydów, za powsta- wanie gorzkiego posmaku w przechowywanym oleju lnia- nym odpowiada utlenianie Met [54]. Degradacja oksydacyj- na cyklolinopeptydów zawierających metioninę może być związana z początkową ilością tlenu rozpuszczonego w ole- ju. Według Przybylskiego i Eskina wystarczy to do uzyska- nia liczby nadtlenkowej 10 meq/kg [55]. Wiele innych przy- kładów wpływu utleniania na aktywność biologiczną pep- tydów i białek opisano w opublikowanych ostatnio pracach przeglądowych [14, 49, 56]. PODSUMOWANIE Argirelina (znana również jako acetylo-heksapeptyd-8), bezpieczna alternatywa dla toksyny botulinowej w zasto- sowaniach kosmetycznych, redukuje linie i zmarszczki mimiczne. Stosowanie kremu przeciwzmarszczkowego jest potencjalnie mniej inwazyjne w porównaniu do innych pro- cedur, takich jak peelingi chemiczne czy zabiegi laserowe. Główną wadą tego rodzaju kosmetyków jest to, że muszą być stosowane codziennie. Przeciwzmarszczkowe działanie Argireliny potwierdzono w wielu publikacjach naukowych. Wykazano także, że peptyd ten jest bezpieczny w kosme- tykach w stężeniach do 0,005%. Skutki długotrwałego sto- sowania Argireliny oraz użycia wyższych stężeń nie zosta- ły dotychczas wystarczająco zbadane. Stabilność Argireli- ny w formulacjach kosmetycznych była przedmiotem kilku opracowań. Podczas gdy forma deacetylowana nie została wykryta, metodą LC-MS udało się zidentyfikować utlenio- ną formę tego peptydu w kremach i produktach typu se- rum. Ze względu na obecność reszty metioniny, Argirelina może łatwo ulec utlenieniu spowodowanemu powietrzem lub niektórymi składnikami preparatów kosmetycznych. Aktywność biologiczna utlenionej formy Argireliny nigdy nie była badana, dlatego jej wpływ na efekty wywierane przez kosmeceutyki nie jest znany. Wskazuje to na potrzebę opra- cowania skutecznych procedur analitycznych do monitoro- wania przemian zachodzących w produktach kosmetycznych. PODZIĘKOWANIA Autorzy pragną podziękować Andrzejowi Reszce (ShimPol, Polska) za możliwość wykorzystania spektrometru LCMS- -IT-TOF. LITERATURA / REFERENCES 1 . Berbos ZJ, Lipham WJ. Update on botulinum toxin and dermal fillers. Curr Opin Ophthalmol. 2010;21(5):387-395. https://doi.org/10.1097/ICU.0b013e32833ce7bc 2 . Kattimani V, Tiwari RVC, Gufran K, et al. Botulinum Toxin Application in Facial Esthetics and Recent Treatment Indications (2013-2018). J Int Soc Prev Community Dent. 2019;9(2):99-105. https://doi.org/10.4103/jispcd.JISPCD_430_18 3 . Przylipiak M, Przylipiak J, Terlikowski R, et al. Improvements in the perception of facial attractiveness following surgical aesthetic treat- ment; study based on online before and after photos. J Cosmet Derma- tol. 2019;18(1):296-300. https://doi.org/10.1111/jocd.12818 4 . Kępa A. Peptydy biomimetyczne i czynniki wzrostu w kosmetologii i medycynie estetycznej. Kosmetologia Estetyczna. 2013;2(2):105-111. 5 . Lupo MP, Cole AL. Cosmeceutical peptides. Dermatol Ther. 2007;20(5):343-349. https://doi.org/10.1111/j.1529-8019.2007.00148.x 6 . Zhang L, Falla TJ. Cosmeceuticals and peptides. Clin Dermatol. 2009;27(5):485-494. https://doi.org/10.1016/j.clindermatol.2009.05.013 7 . Husein El Hadmed H, Castillo RF. Cosmeceuticals: peptides, proteins, and growth factors. J Cosmet Dermatol. 2016;15(4):514-519. https://doi.org/10.1111/jocd.12229 8 . Aguilar-Toalá JE, Hernández-Mendoza A, González-Córdova AF, et al. Potential role of natural bioactive peptides for development of cosme- ceutical skin products. Peptides. 2019;122:170170. https://doi.org/10.1016/j.peptides.2019.170170 9 . Errante F, Ledwoń P, Latajka R, et al. Cosmeceutical Peptides in the Framework of Sustainable Wellness Economy. Front Chem. 2020;8:572923. https://doi.org/10.3389/fchem.2020.572923 10 . Ledwoń P, Errante F, Papini AM, et al. Peptides as Active Ingre- dients: A Challenge for Cosmeceutical Industry. Chem Biodivers. 2021;18(2):e2000833. https://doi.org/10.1002/cbdv.202000833 11 . Ramos-e-Silva M, Celem LR, Ramos-e-Silva S, Fucci-da-Cos- ta AP. Anti-aging cosmetics: facts and controversies. Clin Dermatol. 2013;31(6):750-758. https://doi.org/10.1016/j.clindermatol.2013.05.013 12 . Schagen SK. Topical Peptide Treatments with Effective Anti-Aging Results. Cosmetics. 2017;4(2):16. https://doi.org/10.3390/cosmetics4020016 13 . Draelos ZD. The art and science of new advances in cosmeceuticals. Clin Plast Surg. 2011;38(3):397-407. https://doi.org/10.1016/j.cps.2011.02.002 14 . Vartanian AJ, Dayan SH. Complications of botulinum toxin A use in fa- cial rejuvenation. Facial Plast Surg Clin North Am. 2005;13(1):1-10. https://doi.org/10.1016/j.fsc.2004.04.008 15 . Blanes-Mira C, Clemente J, Jodas G, et al. A synthetic hexapeptide (Ar- gireline) with antiwrinkle activity. Int J Cosmet Sci. 2002;24(5):303- 310. https://doi.org/10.1046/j.1467-2494.2002.00153.x 16 . U.S. National Library of Medicine, Drug Information Portal Mobile Site. https://druginfo.nlm.nih.gov/drugportal/name/Acetyl+hexapep- tide-3. Accessed 27.03.2021. 17 . Lipotec. Argiline. An anti-aging peptide. https://wrinklesystem.com/ laboratorydata/argireline.pdf. Accessed 27.03.2021. 18 . Chen YA, Scheller RH. SNARE-mediated membrane fusion. Nat Rev Mol Cell Biol. 2001;2(2):98-106. https://doi.org/10.1038/35052017 19 . Argireline. https://www.lipotec.com/en/argireline/. Accessed 27.03.2021. 20 . Ruiz MA, Clares B, Morales ME, Gallardo V. Evaluation of the an- ti-wrinkle efficacy of cosmetic formulations with an anti-aging pep- tide (Argireline®). Ars Pharm. 2009;50(4):168-176. http://hdl.handle. net/10481/27392 21 . ClinicalTrials.gov. https://clinicaltrials.gov/ct2/results?recrs=&cond= &term=argireline&cntry=&state=&city=&dist. Accessed 26.03.2021. 22 . Lungu C, Considine E, Zahir S, et al. Pilot study of topical acetyl hexa- peptide-8 in the treatment for blepharospasm in patients receiving botulinum toxin therapy. Eur J Neurol. 2013;20(3):515-518. https://doi.org/10.1111/ene.12009 23 . Grosicki M, Latacz G, Szopa A, et al. The study of cellular cytotoxicity of argireline - an anti-aging peptide. Acta Biochim Pol. 2014;61(1):29-32. 24 . Bos JD, Meinardi MM. The 500 Dalton rule for the skin penetration of chemical compounds and drugs. Exp Dermatol. 2000;9(3):165-169. https://doi.org/10.1034/j.1600-0625.2000.009003165.x 25 . Chen J, Bian J, Hantash BM, et al. Enhanced skin permeation of a nov- el peptide via structural modification, chemical enhancement, and microneedles. bioRxiv. 2020;10.07.312850. https://doi.org/10.1101/2020.10.07.312850 26 . Kraeling ME, Zhou W, Wang, Ogunsola OA. In vitro skin penetration of acetyl hexapeptide-8 from a cosmetic formulation. Cutan Ocul Toxicol. 2015;4(1):46-52. https://doi.org/10.3109/15569527.2014.894521 27 . Krishnan G, Roberts MS, Grice J, et al. Iontophoretic skin permeation of peptides: an investigation into the influence of molecular proper-25 4 / 2021 / vol. 10 Kosmetologia Estetyczna Artykuł ukazał się w „Aesthetic Cosmetology and Medicine” ties, iontophoretic conditions and formulation parameters. Drug Deliv Transl Res. 2014;4(3):222-232. https://doi.org/10.1007/s13346-013-0181 28 . Hoppel M, Reznicek G, Kählig H, et al. Topical delivery of acetyl hexa- peptide-8 from different emulsions: influence of emulsion composi- tion and internal structure. Eur J Pharm Sci. 2015;68:27-35. https://doi.org/10.1016/j.ejps.2014.12 29 . Ji M, Lee HS, Kim Y, et al. Method development for acetyl octapep- tide-3 analysis by liquid chromatography-tandem mass spectrome- try. J Anal Sci Technol. 2020;11(34):1-7. https://doi.org/10.1186/s40543-020-00232-8 30 . Kluczyk A, Ludwiczak J, Modzel M, et al. Argireline: Needle-Free Bo- tox as Analytical Challenge. Chem Biodivers. 2021;18(3):e2000992. https://doi.org/10.1002/cbdv 31 . Makowska J, Tesmar A, Wyrzykowski D, Chmurzyński L. Investigation of the Binding Properties of the Cosmetic Peptide Argireline and Its Derivatives Towards Copper(II) Ions. J Solution Chem. 2018;47:80-91. https://doi.org/10.1007/s10953-017-0705-9 32 . Lim SH, Sun Y, Thiruvallur Madanagopal T, et al. Enhanced Skin Per- meation of Anti-wrinkle Peptides via Molecular Modification [pub- lished correction appears in Sci Rep. 2018 Apr 20;8(1):6500]. Sci Rep. 2018;8(1):1596. https://doi.org/10.1038/s41598-017-18454-z 33 . INCI Decoder. https://incidecoder.com/ingredients/acetyl-hexapep- tide-8. Accessed 25.03.2021. 34 . Cosmetic Ingredient Review. https://www.cir-safety.org/ingredients. Accessed 06.04.2021. 35 . Drugbank. https://go.drugbank.com/drugs/DB11709. Accessed 12.02.2021. 36 . Deciem. https://theordinary.deciem.com/pl/rdn-argireline-solution- 10pct-30ml.html. Accessed 30.03.2021. 37 . U.S. National Library of Medicine, DailyMed. https://dailymed.nlm. nih.gov/dailymed/drugInfo.cfm?setid=da884734-c4fc-479f-887e- e55ba6c8571e. Accessed 30.03.2021. 38 . Ferrer Montiel AV, Fernández Ballester G, García Antón JM, et al. Compounds which Inhibit Neuronal Exocytosis. WO 2013153191A1. 39 . Rozporządzenie Ministra Zdrowia z dnia 19 marca 2020 r. w spraw- ie metod oznaczeń próbek niezbędnych do kontroli bezpieczeństwa produktów kosmetycznych. Dziennik Ustaw Rzeczypospolitej Polskiej 2020 poz. 931. 40 . Zhou W, Wang PG, Krynitsky AJ, Rader JI. Rapid and simultaneous de- termination of hexapeptides (Ac-EEMQRR-amide and H 2N-EEMQRR- amide) in anti-wrinkle cosmetics by hydrophilic interaction liquid chromatography-solid phase extraction preparation and hydrophilic interaction liquid chromatography with tandem mass spectrometry. J Chromatogr A. 2011;1218(44):7956-7963. https://doi.org/10.1016/j.chroma.2011.08 41 . Zhou W, Wang PG. Cosmetic bioanalysis using LC-MS: challenges and future outlook. Bioanalysis. 2014;6(4):437-440. https://doi.org/10.4155/bio.13 42 . Stefanowicz P. Electrospray mass spectrometry and tandem mass spectrometry of the natural mixture of cyclic peptides from linseed. Eur J Mass Spectrom (Chichester). 2004;10(5):665-671. https://doi.org/10.1255/ejms 43 . Kligman D. Cosmeceuticals. Dermatol Clin. 2000;18(4):609-615. https://doi.org/10.1016/s0733-8635(05)70211-4 44 . Morrison I. Emulsion Technology Dispersions in liquids: suspensions, emulsions, and foams. ACS National Meeting, April 9-10, 2008, New Or- leans. https://pdf4pro.com/view/dispersions-in-liquids-suspensions- emulsions-and-foams-421f57.html. Accessed 06.04.2021. 45 . Califf RM, McCall J, Mark DB. Cosmetics, Regulations, and the Pub- lic Health: Understanding the Safety of Medical and Other Products. JAMA Intern Med. 2017;177(8):1080-1082. https://doi.org/10.1001/jamainternmed.2017.2773 46 . Kwa M, Welty LJ, Xu S. Adverse Events Reported to the US Food and Drug Administration for Cosmetics and Personal Care Products. JAMA Intern Med. 2017;177(8):1202-1204. https://doi.org/10.1001/jamainternmed.2017 47 . Lim SH, Sun Y, Madanagopal TT, et al. enhanced skin permeation of anti-wrinkle peptides via molecular modification. Sci Report. 2018;25(8):1596. https://doi.org/10.1038/s41598-017-18454-z 48 . Schagen SH. Topical peptide treatments with effective anti-aging re- sults. Cosmetics. 2017;4(2):16. https://doi.org/10.3390/cosmetics4020016 49 . Torosantucci R, Schöneich C, Jiskoot W. Oxidation of therapeutic pro- teins and peptides: structural and biological consequences. Pharm Res. 2014;31(3):541-553. https://doi.org/10.1007/s11095-013-1199 50 . Davies MJ, Truscott RJ. Photo-oxidation of proteins and its role in cat- aractogenesis. J Photochem Photobiol B. 2001;63(1-3):114-125. https://doi.org/10.1016/s1011-1344(01)00208-1 51 . Regl C, Wohlschlager T, Holzmann J, Huber CG. A Generic HPLC Meth- od for Absolute Quantification of Oxidation in Monoclonal Antibod- ies and Fc-Fusion Proteins Using UV and MS Detection. Anal Chem. 2017;89(16):8391-8398. https://doi.org/10.1021/acs.analchem.7b01755 52 . Nabuchi Y, Fujiwara E, Ueno K, et al. Oxidation of recombinant human parathyroid hormone: effect of oxidized position on the biological ac- tivity. Pharm Res. 1995;12(12):2049-2052. https://doi.org/10.1023/a:1016281031373 53 . Mozziconacci O, Ji JA, Wang YJ, Schöneich C. Metal-catalyzed oxida- tion of protein methionine residues in human parathyroid hormone (1-34): formation of homocysteine and a novel methionine-depen- dent hydrolysis reaction. Mol Pharm. 2013;10(2):739-755. https://doi.org/10.1021/mp300563m 54 . Brühl L, Matthäus B, Scheipers A, Hofmann T. Bitter off-taste in stored cold-pressed linseed oil obtained from different varieties. Eur J Lipid Sci Technol. 2008;110(7):625-631. https://doi.org/10.1002/ejlt.200700314 55 . Przybylski R, Eskin NAM. A comparative study on the effectiveness of nitrogen or carbon dioxide flushing in preventing oxidation during the heating of oil. J Am Oil Chem Soc. 1988;65(4):629. https://doi.org/10.1007/BF02540692 56 . Grassi L, Cabrele C. Susceptibility of protein therapeutics to sponta- neous chemical modifications by oxidation, cyclization, and elimina- tion reactions. Amino Acids. 2019;51(10-12):1409-1431. https://doi.org/10.1007/s00726-019-02787-2 otrzymano / received: 03.04.2021 | poprawiono / corrected: 17.04.2021 | zaakceptowano / accepted: 01.05,2021.4 / 2021 / vol. 10 Kosmetologia Estetyczna 27 PREZENTACJA KOSMETOLOGIA ESTETYCZNA P NIECHCIANE PAMIĄTKI Z WAKACJI W swoim portfolio marka FILLMED, oprócz preparatów przeznaczonych do iniekcji, ma również zabiegi kosmetologiczne oraz bogate w składniki dermato- logiczne, kosmeceutyki Skin Per- fusion do stosowania w gabinecie oraz w ramach pielęgnacji domo- wej. Boostery Skin Perfusion to preparaty, zawierające substan- cje aktywne w optymalnych i bez- piecznych dla skóry stężeniach. Dzięki innowacyjnemu syste- mowi dwukomorowemu i opa- kowaniu typu airless, składniki aktywne Boosterów Skin Perfu- sion zachowują swoją świeżość, stabilność i skuteczność działa- nia. Każdy Booster odpowiada na konkretny problem skóry: zmarszczki, suchość skóry, utra- tę blasku i jędrności, przebarwie- nia czy niedoskonałości. GŁĘBOKIE NAWILŻANIE Po wakacjach skóra bywa moc- no przesuszona i ściągnięta, a na jej powierzchni może pojawić się siateczka drobnych zmarsz- czek. Warto wtedy sięgnąć po HYDRA-BOOSTER zawierający wysoko- i niskocząsteczkowy kwas hialuronowy o działaniu nawilżającym oraz Ceramid NP, który uszczelnia naskórek i chroni skórę przed suchością. NIE DAJ PLAMY Nowe przebarwienia posłonecz- ne to częsty i uciążliwy problem po wakacjach. BRIGHT-BOOSTER z kwasem fitowym i glikolowym skutecznie rozjaśnia nieestetycz- ne plamy oraz dzięki zawartości heksylorezorcynolu dodatkowo hamuje syntezę melaniny, aby zapobiec pojawianiu się nowych przebarwień. ODZYSKAJ RÓWNOWAGĘ Drobne wypryski, stany zapal- ne i rozszerzone pory to częste skutki uboczne nadmiernego przetłuszczania się skóry latem. BALANCE-BOOSTER z kwasem salicylowym i mlekowym oraz cynkiem złuszcza naskórek, skutecznie odblokowuje ujścia gruczołów łojowych i reguluje wydzielanie sebum. Dzięki temu szybko przywraca cerze matowy wygląd oraz zapobiega pojawia- niu się nowych stanów zapalnych i nieestetycznych wyprysków. GWIAZDA ODMŁADZANIA Cząsteczka retinolu nie ma sobie równych, jeśli chodzi o działanie przeciwzmarszczkowe, i jest jed- nym z najlepiej przebadanych składników pod kątem odmła- dzania skóry. TIME-BOOSTER z retinolem, alfa-galaktozą wzmacniającą działanie retino- idu oraz kwasem hialuronowym sprawi, że skóra w krótkim czasie odzyska młodszy wygląd, będzie lepiej napięta, a zmarszczki sta- ną się płytsze i mniej widoczne. AKCJA ANTYOKSYDACJA Stres oksydacyjny pod wpływem promieniowania UV przyspie- sza degradację włókien kolagenu i elastyny w skórze, przez co traci ona swoje napięcie i sprężystość, a to niekorzystnie wpływa na owal i rysy twarzy. Ujędrniający LIFT-BOOSTER dzięki formule za- wierającej resweratrol o działaniu przeciwutleniającym oraz pepty- dy elastyny i kolagenu, zagęszcza skórę i przywraca twarzy młod- szy i bardziej wypoczęty wygląd. Jesień t o idealny moment na zadbanie o dobrą kondycję i zdrowy wygląd skóry, która po okresie nadmiernej ekspozycji na promieniowanie UV oraz wysoką temperaturę wymaga szczególnej troski. Wbrew pozorom dotyczy to nie tylko cery dojrzałej czy skłonnej do przebarwień, bo pod wpływem słońca także skóra sucha staje się mocniej przesuszona, a łojotokowa bardziej się przetłuszcza i pojawiają się na niej niedoskonałości. Z tego powodu, szczególnie po wakacjach, warto zadbać o pielęgnację cery dobraną do jej specyficznych potrzeb. Laboratoires FILL-MED Polska sp. z o.o. Next >